CircNFIX通过调节miR-378e/RPN2轴促进胶质瘤的进展

2019年12月30日，J Exp Clin Cancer Res杂志（IF5.646）发表了福建医科大学附属第一医院康德智课题组一篇标题为“CircNFIX promotes progression of glioma through regulating miR-378e/RPN2 axis”的文章，阐述了circNFIX在胶质瘤中的作用机制，希望能为胶质瘤的治疗找到新的靶点。

本研究所用RNase R由吉赛生物提供，保证了实验所用circRNA的纯度。

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circNFIX在胶质瘤组织高表达

circNFIX在胶质瘤进展中起着重要作用，这个已经有所研究，然而circNFIX参与胶质瘤进展的机制仍知之甚少。本研究测定了64例胶质瘤组织和15例正常人标本中circNFIX的水平。circNFIX在胶质瘤组织中的表达水平与正常对照组相比明显增强，并且在低分级组和高分级组之间存在显著差异。

表1 胶质瘤患者circNFIX表达与临床特征的相关性

将64名患者分为高或低circNFIX表达组，作者发现circNFIX的高表达与肿瘤分期、肿瘤大小和患者生存率差相关，但与其他临床特征（包括年龄、性别和肿瘤位置）无关。

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敲除circNFIX抑制胶质瘤的进展

基因敲降circNFIX，导致细胞在G0-G1期的细胞周期停滞，并显著抑制了细胞系中的糖酵解过程，trans-well检测表明细胞的迁移和侵袭能力也被显著抑制，流式细胞术的结果显示细胞产生大量凋亡。

图示：敲降circNFIX对胶质瘤细胞周期、糖酵解、凋亡等影响

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circNFIX是miR-378e的海绵

荧光素酶实验、RIP实验和RNA pull-down实验证实circNFIX是miR-378e的海绵，miR-378e表达量因circNFIX过表达而明显降低，并因circNFIX敲降而增加。

图示：circNFIX是miR-378e的海绵分子

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过表达miR-378e抑制胶质瘤的进展

过表达miR-378e，细胞周期在G0-G1期被抑制，细胞中葡萄糖消耗、乳酸产生和HK2蛋白表达的大幅降低、阻断了细胞的迁移和侵袭能力、增加了细胞的凋亡率。

图示：过表达miR-378e抑制胶质瘤的进展

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miR-378e参与circNFIX介导的胶质瘤进展

为了进一步探讨miR-378e是否参与circNFIX介导的胶质瘤进展，用si-NC、si-circNFIX、si-circNFIX和抗miR-NC或抗miR-378e转染细胞。细胞中miR-378e的水平通过circNFIX敲降而增加，并且通过转染抗miR-378e而明显降低。此外，细胞中miR-378e耗竭显著减弱了circNFIX沉默引起的细胞周期阻滞、糖酵解抑制、迁移和侵袭抑制以及凋亡诱导。

图示：miR-378e参与circNFIX介导的胶质瘤进展

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miR-378e靶向调节RPN2

StarBase数据库预测RPN2具有miR-378e的潜在互补序列。荧光素酶报告实验用于验证miR-378e与RPN2的关联。

图示：RPN2是miR-378e的靶基因

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circNFIX在胶质瘤细胞中通过海绵miR-378e来调节RPN2

GERIA在线分析了胶质瘤组织中10个异常表达的基因，其中RPN2在肿瘤组织中的表达明显高于正常组。qRT-PCR也显示了同样的结果。蛋白质印迹实验显示RPN2蛋白水平由circNFIX正向调节，由miR-378e负向调节。同时，circNFIX介导的RPN2蛋白表达被miR-378e的引入抵消。

图示：circNFIX在胶质瘤细胞中通过海绵miR-378e来调节RPN2

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动物模型

为了进一步探讨circNFIX在体内胶质瘤中的生物学作用，转染sh-circNFIX或sh-NC的细胞注射到裸鼠体内，建立动物模型。结果显示，与sh-NC组相比，sh-circNFIX组肿瘤体积明显减小、肿瘤重量显著降低。此外，收集肿瘤组织并检测circNFIX、miR-378e和RPN2表达水平。结果显示，与sh-NC组相比，sh-circNFIX组circNFIX和RPN2蛋白表达水平显著降低，但miR-378e表达水平升高。

图示：沉默circNFIX通过调控miR-378e/RPN2轴抑制肿瘤生长

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结论

对circNFIX在胶质瘤中致癌作用的研究表明，circNFIX的敲降可能通过调节miR-378e/RPN2轴作为ceRNA抑制了胶质瘤的体外和体内进展。本研究阐明了胶质瘤发生发展的新机制，为胶质瘤的治疗指明了新的靶点。

参考文献

Ding C, Wu Z, You H, Wu X, Lin Z, Kang D, et al. CircNFIX promotes progression of glioma through regulating miR-378e/RPN2 axis. J Exp Clin Cancer Res. 2019 Dec 30;38(1):506

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